CLASP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404219-ACT

CLASP1（cytoplasmic linker associated protein 1）は、微小管のプラス端に追従するタンパク質（＋端追跡タンパク質）であり、細胞皮質および動原体において微小管ネットワークを安定化・組織化し、有糸分裂時の紡錘体形成、染色体整列、そして正確な分配を協調的に制御します。EBタンパク質、CLIPタンパク質、ならびに動原体関連因子との相互作用を介して、CLASP1は細胞極性、細胞内輸送、指向性移動に不可欠な微小管のレスキュー（再成長）と動的不安定性を支えます。CLASP1によって制御される微小管ダイナミクスが攪乱されると、有糸分裂エラーや異数性が促進され得るため、その機能は増殖制御およびゲノム安定性に広く関わる経路と関連づけられます。そのためCLASP1は、細胞骨格制御、細胞周期進行、ならびに微小管挙動を細胞の形質転換やストレス応答へと結び付ける機構を扱う研究で、しばしば解析対象となっています。

CLASP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CLASP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CLASP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CLASP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCLASP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CLASP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCLASP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCLASP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCLASP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCLASP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。