Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cks1: sc-403019-ACT

CKS1B code Cks1, une sous-unité régulatrice conservée des kinases dépendantes des cyclines (CDK) qui coordonne la progression du cycle cellulaire en modulant l’activité des CDK et la sélection de leurs substrats. Cks1 est étroitement liée au contrôle ubiquitine–protéasome médié par le complexe SCF(SKP2) des inhibiteurs du cycle cellulaire tels que CDKN1B/p27, influençant ainsi la transition G1/S, la compétence de réplication et la fidélité des points de contrôle. Grâce à ces interactions, CKS1B contribue à des réseaux de signalisation prolifératifs qui recoupent les réponses aux dommages de l’ADN et le contrôle de la mitose. Une expression dérégulée de CKS1B a été associée à des phénotypes de prolifération aberrante et d’instabilité génomique, fréquemment étudiés en oncologie et dans la recherche sur les hémopathies malignes.

Cks1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CKS1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cks1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CKS1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CKS1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cks1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CKS1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cks1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cks1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CKS1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.