CKR-9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419702

概要

Ccr9はCKR-9（CCR9）をコードしており、CCL25に結合してリンパ球の走化性移動を誘導することで最もよく知られているGタンパク質共役型のケモカイン受容体です。マウスでは、CCR9は移動シグナル、インテグリン依存性の接着、および組織微小環境内での位置取りを調整することにより、胸腺細胞の発生や腸管ホーミング・プログラムに寄与します。CKR-9のシグナル伝達は、カルシウムフラックスやMAPK/PI3Kカスケードなどの典型的なGPCR経路と連携し、免疫細胞の活性化状態、生存、運動性に影響を及ぼします。CCR9–CCL25軸の活性が破綻すると、粘膜部位における炎症過程や、免疫介在性病態に関わる異常な白血球局在を支える機構に関与することが示唆されています。

CKR-9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcr9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccr9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccr9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CKR-9タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CKR-9シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccr9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CKR-9の機能に不可欠なCcr9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccr9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CKR-9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCKR-9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccr9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CKR-9 HDRプラスミド（m）および CKR-9 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcr9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcr9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。