CKR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419705

Visão geral

Ccr2 codifica o recetor de quimiocinas CKR-2 (CCR2), um GPCR de sete domínios transmembrana que se liga a CCL2/MCP-1 e a ligandos relacionados para orientar a quimiotaxia de monócitos e de outros subconjuntos mieloides. Após a ligação do ligando, o CKR-2 sinaliza através de vias dependentes de Gαi para regular as cascatas PI3K/AKT e MAPK, o fluxo de cálcio, a ativação de integrinas e a remodelação do citoesqueleto, moldando o tráfego leucocitário e a polarização inflamatória. No rato, a atividade de Ccr2 é central para o recrutamento de monócitos inflamatórios para locais de lesão tecidular e infeção e influencia a acumulação de macrófagos em diversos microambientes inflamatórios. A sinalização desregulada do eixo CCR2 é frequentemente estudada na inflamação crónica, na neuroinflamação e na biologia mieloide associada a tumores como um fator impulsionador da infiltração de células imunitárias e de redes de citocinas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CKR-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ccr2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ccr2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ccr2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CKR-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ccr2 para a investigação da sinalização de CKR-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ccr2 críticos para a função CKR-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ccr2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CKR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CKR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ccr2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CKR-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CKR-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ccr2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ccr2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.