CKR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419701

概要

Ccr1 はケモカイン受容体 CKR-1（CCR1）をコードしており、これは炎症性 CC ケモカインに結合して、白血球の走化性、接着、組織への浸潤を制御する G タンパク質共役型受容体です。CKR-1 のシグナル伝達では三量体 G タンパク質が関与し、カルシウムフラックス、MAPK/ERK カスケード、PI3K 依存性経路を活性化して、細胞骨格の再構築と方向性のある移動を協調的に制御します。マウスの免疫系コンパートメントにおいて Ccr1 は単球／マクロファージおよび好中球のトラフィッキングに寄与し、サイトカイン駆動性の炎症回路の形成にも関与します。CCR1 活性の異常は炎症性疾患や自己免疫様病態モデルと関連づけられており、感染、線維化、腫瘍関連骨髄系細胞のリクルートなどの文脈で研究されています。

CKR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcr1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccr1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccr1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CKR-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CKR-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccr1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CKR-1の機能に不可欠なCcr1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccr1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CKR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCKR-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccr1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CKR-1 HDRプラスミド（m）および CKR-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcr1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcr1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。