CIDE-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403808

概要

CIDEBは、脂質滴（リピッドドロップレット）の動態、エネルギー恒常性、ならびに細胞死に関連する過程の制御に関与するとされるCIDEドメイン含有タンパク質ファミリーの一員であるCIDE-Bをコードします。脂質の取り扱いが活発なヒト組織において、CIDE-Bは中性脂質の貯蔵・分解回転と代謝シグナル伝達を結び付ける経路に寄与し、肝臓での脂質代謝や脂肪細胞に関連するプログラムなどに関与します。CIDEBの発現や機能の変化は、脂質蓄積の異常や、肥満・インスリン抵抗性・脂肪肝に関連する病態機構に関係する代謝表現型と関連付けられています。そのためCIDEBは、代謝活性の高い細胞において、脂質滴の生物学をストレス応答やミトコンドリア機能と協調させる役割という観点から研究されています。

CIDE-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCIDEB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CIDEB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CIDEBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CIDE-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CIDE-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CIDEB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CIDE-Bの機能に不可欠なCIDEBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CIDEBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CIDE-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCIDE-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CIDEB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CIDE-B HDRプラスミド（h）および CIDE-B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCIDEBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCIDEB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。