CIDE-A Double Nickase Plasmid (h): sc-405086-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CIDE-A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CIDE-A Double-Nickase-Plasmid (h) und CIDE-A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CIDEA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CIDE-A: sc-293289
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CIDE-A Double Nickase Plasmid (h) | sc-405086-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CIDE-A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405086-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CIDEA kodiert CIDE-A, ein mit Lipidtröpfchen assoziiertes Protein, das in Adipozyten angereichert ist, die Speicherung von Triglyceriden fördert und das Wachstum von Lipidtröpfchen reguliert. Dadurch verknüpft es die zelluläre Energiebilanz mit dem Stoffwechsel des Fettgewebes. CIDE-A ist an Signalwegen beteiligt, die Lipolyse, mitochondriale oxidative Aktivität und thermogenes Programmieren steuern, und integriert so den Nährstoffstatus mit der Lipidverarbeitung. Eine veränderte CIDEA-Expression wurde mit adipositasassoziierten metabolischen Phänotypen, Veränderungen der Insulinsensitivität, hepatischer Steatose sowie einer allgemeineren Dysregulation der Lipidhomöostase in Verbindung gebracht. Daher ist CIDE-A ein geeignetes Ziel, um in humanen Zellmodellen die Adipozytendifferenzierung, die Biologie von Lipidtröpfchen und Stressantworten des Stoffwechsels zu untersuchen.
CIDE-A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CIDEA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CIDEA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CIDEA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CIDEA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.