CIDE-A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405086-ACT

CIDEA（cell death–inducing DFFA-like effector A）は、脂肪滴関連タンパク質CIDE-Aをコードしており、中性脂質の貯蔵および脂肪細胞代謝の主要な制御因子です。ヒトの脂肪組織や褐色／ベージュ脂肪に関連するプログラムにおいて、CIDE-Aは脂肪滴の成長とリモデリングを支え、トリグリセリドの代謝回転に影響を与えることで、脂質貯蔵の動態をミトコンドリア活性および熱産生遺伝子ネットワークと結び付けます。CIDEAの発現と機能は、脂肪細胞分化や脂質取り扱い過程を含むエネルギーホメオスタシス経路と密接に関連しており、肥満、インスリン抵抗性、脂肪肝に関連した脂質調節異常などの代謝表現型との関連が報告されています。組織や状態に依存して作用する代謝エフェクターとして、CIDE-Aは代謝活性の高い細胞における脂肪細胞分化、脂肪滴生物学、ストレス応答での役割を明らかにするために一般的に研究されています。

CIDE-A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CIDEAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CIDE-A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CIDEA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCIDEA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CIDE-Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCIDEA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCIDE-A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCIDEA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCIDE-A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。