Plásmido CRISPR de Activación (h) CIDE-A: sc-405086-ACT

CIDEA (efector A similar a DFFA inducidor de muerte celular) codifica la proteína CIDE-A asociada a las gotículas lipídicas, un regulador clave del almacenamiento de lípidos neutros y del metabolismo de los adipocitos. En el tejido adiposo humano y en programas relacionados con la grasa parda/beige, CIDE-A favorece el crecimiento y la remodelación de las gotículas lipídicas e influye en el recambio de triglicéridos, acoplando la dinámica del almacenamiento lipídico a la actividad mitocondrial y a redes génicas termogénicas. La expresión y la función de CIDEA están estrechamente vinculadas a vías de homeostasis energética, incluidas la adipogénesis y los procesos de manejo de lípidos, y se han asociado con fenotipos metabólicos como la obesidad, la resistencia a la insulina y la desregulación lipídica relacionada con el hígado graso. Como efector metabólico dependiente del tejido y del estado, CIDE-A se estudia comúnmente por sus funciones en la diferenciación adipocitaria, la biología de las gotículas lipídicas y las respuestas al estrés en células metabólicamente activas.

CIDE-A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CIDEA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CIDE-A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CIDEA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CIDEA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CIDE-A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CIDEA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CIDE-A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CIDE-A en células tumorales con expresión de CIDEA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.