ChoK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403793

概要

CHKAは、ホスファチジルコリン生合成のケネディ経路において、コリンをホスホコリンへリン酸化する律速酵素であるコリンキナーゼα（ChoK）をコードしています。ChoKはホスホコリンのプール量と膜リン脂質の産生を制御することで、脂質代謝を細胞周期の進行、膜の生合成、そしてホスファチジルコリン由来のセカンドメッセンジャーに依存するシグナル伝達ネットワークと結び付けています。CHKA活性の変化は、複数の疾患関連の細胞状況で観察される代謝リプログラミングや増殖プログラムの破綻と関連しており、脂質駆動性シグナルを解析するうえで有用な結節点となります。CHKA/ChoKの研究は、膜動態、ストレス応答、腫瘍性の増殖因子シグナルを制御する経路と交差することが一般的です。

ChoK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHKA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHKA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHKAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ChoKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ChoKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHKA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ChoKの機能に不可欠なCHKAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CHKAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ChoK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびChoK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHKA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ChoK HDRプラスミド（h）および ChoK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHKAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHKA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。