Plásmido CRISPR de Activación (h) CHMP4C: sc-404325-ACT

CHMP4C codifica un componente central de la maquinaria ESCRT-III que remodela membranas durante las etapas tardías de la clasificación endosomal, la formación de cuerpos multivesiculares y la abscisión citocinética. CHMP4C se integra en el punto de control de la abscisión para ayudar a coordinar la separación celular final con la segregación cromosómica y la integridad del genoma, vinculando la función de ESCRT con la progresión mitótica y la señalización asociada al daño del ADN. Una actividad desregulada de ESCRT-III puede alterar la desregulación a la baja de receptores, el tráfico vesicular y la fidelidad de la división celular, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto de la tumorigenesis y la inestabilidad cromosómica. Como resultado, CHMP4C se investiga habitualmente en vías que gobiernan la escisión de membranas, el control del ciclo celular y las respuestas al estrés que influyen en fenotipos proliferativos y de mantenimiento del genoma.

CHMP4C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHMP4C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CHMP4C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHMP4C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHMP4C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CHMP4C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHMP4C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CHMP4C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CHMP4C en células tumorales con expresión de CHMP4C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.