CHMP1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406531

概要

CHMP1B（charged multivesicular body protein 1B）は、エンドソームでのソーティングや多小胞体（multivesicular body：MVB）形成に必要な膜リモデリング過程を駆動するESCRT-III機構の中核構成因子です。ESCRT依存性経路を介して、CHMP1Bは受容体のダウンレギュレーション、リソソームへの輸送、オートファジー関連の膜動態、ならびに細胞質分裂終期におけるアブシジョンの完了に寄与します。CHMP1Bが適切に機能することで、ユビキチン化されたカーゴや膜タンパク質の運命が制御され、プロテオスタシスおよびシグナル伝達の恒常性が維持されます。CHMP1B依存性トラフィッキングの変化を含むESCRT-III機能の破綻は、神経変性過程、ウイルス出芽、ならびにがんに関連した増殖因子受容体シグナルの変化といった文脈で頻繁に研究されています。

CHMP1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHMP1B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHMP1B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHMP1Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHMP1Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHMP1Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHMP1B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHMP1Bの機能に不可欠なCHMP1Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CHMP1Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHMP1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCHMP1B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHMP1B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHMP1B HDRプラスミド（h）および CHMP1B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHMP1Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHMP1B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。