Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CHMP1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406556
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CHMP1A CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してCHMP1Aゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CHMP1A 抗体 (B-5): sc-271617
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CHMP1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-406556 | 20 µg | $397.00 |
概要
CHMP1A（charged multivesicular body protein 1A）は、多小胞体（multivesicular body：MVB）の形成と、エンドソーム内カーゴのリソソーム分解への仕分けを駆動する膜リモデリングを担うESCRT-III装置の中核構成因子です。ESCRT依存的なプロセスを介して、CHMP1Aは受容体のダウンレギュレーション、膜切断（scission）イベント、さらにプロテオスタシス、細胞質分裂、核膜ダイナミクスのより広範な制御にも関与します。CHMP1Aに関連するエンドリソソーム輸送が破綻すると、シグナル伝達経路の持続時間や細胞恒常性が変化し、膜輸送障害を特徴とする神経発達表現型やその他の疾患とESCRT機能不全を結び付ける要因となり得ます。ヒト遺伝子としてのCHMP1Aは、エンドソーム成熟や小胞介在性シグナル制御が疾患関連の細胞状態において重要となる文脈で、しばしば研究対象となっています。
CHMP1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHMP1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHMP1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHMP1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHMP1Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、CHMP1Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHMP1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- CHMP1Aの機能に不可欠なCHMP1Aエクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、CHMP1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- CHMP1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCHMP1A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHMP1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
CHMP1A HDRプラスミド（h）および CHMP1A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHMP1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHMP1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。