cHMGCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417181

概要

HMGCS1は、細胞質型3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリルCoA合成酵素（cHMGCS）をコードしており、アセトアセチルCoAとアセチルCoAからHMG-CoAを生成する反応を触媒する、メバロン酸経路の鍵酵素です。この段階はステロールおよびイソプレノイドの生合成を支え、細胞内アセチルCoAの利用可能性をコレステロール産生やプレニル化依存的なシグナル伝達と結び付けます。HMGCS1の活性は脂質恒常性プログラムや代謝遺伝子発現のフィードバック制御と密接に統合されており、膜の生合成やレドックスバランスに影響します。メバロン酸経路フラックスの破綻は、増殖の変化、代謝ストレス応答の変容、ならびに心血管疾患や神経変性疾患研究に関連する表現型と関連付けられています。

cHMGCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHMGCS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HMGCS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HMGCS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cHMGCSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cHMGCSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HMGCS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cHMGCSの機能に不可欠なHMGCS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HMGCS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cHMGCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcHMGCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HMGCS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cHMGCS HDRプラスミド（h）および cHMGCS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHMGCS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHMGCS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。