CHDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432328

概要

Chdh はコリン脱水素酵素（CHDH）をコードしており、CHDH はミトコンドリア内膜に局在する酵素として、コリンをベタインアルデヒドへ酸化する反応を触媒します。これにより下流のベタイン産生および一炭素代謝が支えられます。メチル基供与体の利用可能性やオスモライト（浸透圧調節物質）バランスとの関連を通じて、CHDH はリン脂質恒常性、ミトコンドリアの生体エネルギー代謝、ならびに代謝・酸化ストレスに対する細胞応答に影響を与えます。マウスでは、コリン酸化の攪乱が肝臓での脂質取り扱いと全身のエネルギーバランスに影響し得ることから、CHDH 関連経路は脂肪肝やそれに関連する心代謝リスク形質に関わる代謝表現型と結び付けられます。これらの機能により、CHDH は哺乳類生理におけるミトコンドリア代謝、メチル化依存的制御、栄養—遺伝子相互作用を研究する上で有用な結節点となります。

CHDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるChdh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Chdh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Chdhのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHDHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHDHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Chdh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHDHの機能に不可欠なChdhエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Chdhゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCHDH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Chdh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHDH HDRプラスミド（m）および CHDH HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはChdhホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のChdh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。