CHD7 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404017-LAC

CHD7 kodiert das Chromodomän-Helikase-DNA-bindende Protein 7, einen ATP-abhängigen Chromatin-Remodeler, der Histonmarkierungen ausliest und die Nukleosomenpositionierung reguliert, um während der Entwicklung und der Festlegung von Zelllinien Transkriptionsprogramme zu steuern. Es verknüpft epigenetische Signalgebung mit der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren und beeinflusst durch eine breite Modulation von Genexpressionsnetzwerken Prozesse wie die Entwicklung der Neuralleiste, die Neurogenese und die Organmorphogenese. Die CHD7-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die die Chromatinorganisation, die Transkription durch RNA-Polymerase II und Entscheidungen über das Zellschicksal steuern. Eine fehlregulierte CHD7-Funktion wird mit Entwicklungsstörungen, einschließlich des CHARGE-Syndroms, in Verbindung gebracht und im Kontext neuroentwicklungsbedingter und angeborener Phänotypen untersucht.

CHD7 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CHD7-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CHD7 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CHD7-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CHD7-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CHD7-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.