CHCHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425804

概要

Chchd3 は、ミトコンドリア接触部位・クリステ構築システム（MICOS）の中核構成因子である CHCHD3（別名 Mic19）をコードしており、ミトコンドリア内膜の構造とクリステ接合部の完全性を維持します。CHCHD3 は、クリステ接合部におけるタンパク質複合体の足場として機能し、ミトコンドリアのダイナミクスやタンパク質輸入機構と協調することで、酸化的リン酸化の効率、呼吸鎖の構成、ミトコンドリアの品質管理を支えます。CHCHD3 を含む MICOS 構成因子の破綻は、バイオエネルギー代謝の変化、活性酸素種（ROS）の増加に関連し、アポトーシス、マイトファジー、細胞ストレスシグナル伝達への下流影響を引き起こします。これらの過程は、ミトコンドリア超微細構造と呼吸が主要な表現型となる神経変性、心代謝機能障害、がん細胞の代謝適応のモデルにおいて、しばしば検証対象となります。

CHCHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるChchd3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Chchd3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Chchd3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CHCHD3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CHCHD3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Chchd3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CHCHD3の機能に不可欠なChchd3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Chchd3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CHCHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCHCHD3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Chchd3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CHCHD3 HDRプラスミド（m）および CHCHD3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはChchd3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のChchd3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。