Partículas Lentivirales de Activación (h2) CHCHD2: sc-412127-LAC-2

El gen humano CHCHD2 (proteína 2 que contiene el dominio hélice-enrollada-hélice-hélice-enrollada-hélice) codifica una pequeña proteína mitocondrial localizada en el espacio intermembrana que contribuye a la homeostasis mitocondrial, apoyando la fosforilación oxidativa, la arquitectura de las crestas y la respiración celular tanto en condiciones basales como de estrés. CHCHD2 participa en redes de respuesta al estrés mitocondrial y se ha vinculado con la regulación del equilibrio redox y de la señalización relacionada con la apoptosis, lo que la hace relevante para desentrañar la comunicación cruzada entre la función mitocondrial y las vías de supervivencia celular. Las perturbaciones genéticas y funcionales de CHCHD2 se asocian con fenotipos neurodegenerativos, incluida la enfermedad de Parkinson y firmas relacionadas de disfunción mitocondrial, así como con perfiles bioenergéticos alterados descritos en contextos de biología del cáncer. La edición genética de CHCHD2 permite estudios mecanísticos de la dinámica mitocondrial, el desempeño de la cadena respiratoria y programas transcripcionales adaptativos al estrés en modelos de células humanas, incluidos ensayos del potencial de membrana, la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la mitofagia.

Las partículas de activación lentiviral CHCHD2 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CHCHD2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CHCHD2 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CHCHD2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CHCHD2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CHCHD2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.