CH25H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419641
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CH25H O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CH25H, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CH25H Anticorpo (1G8): sc-293256
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CH25H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419641 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ch25h codifica a colesterol 25-hidroxilase (CH25H), uma enzima associada ao retículo endoplasmático que converte colesterol em 25-hidroxicolesterol, um oxisterol que modula a composição lipídica das membranas e o controle transcricional da homeostase do colesterol. Por meio de interação com programas regulados por esteróis, como a sinalização de SREBP e receptores nucleares responsivos a oxisteróis, a CH25H influencia o metabolismo lipídico, a sinalização imune inata e a expressão de genes inflamatórios. Em modelos murinos, a atividade de Ch25h tem sido associada a estados de ativação de macrófagos, vias de restrição antiviral e regulação de redes de citocinas. A produção desregulada de oxisteróis é relevante para estudos de inflamação metabólica e remodelamento tecidual mediado pelo sistema imune, nos quais alterações no manejo do colesterol podem moldar respostas celulares ao estresse e saídas de sinalização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CH25H (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ch25h em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ch25h, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ch25h na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CH25H.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ch25h para a investigação da sinalização de CH25H, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ch25h críticos para a função CH25H
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ch25h para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CH25H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CH25H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ch25h. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CH25H Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CH25H (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ch25h para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ch25h definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.