Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEP135: sc-411306-ACT

Le gène humain **CEP135** code une protéine centrosomale essentielle qui se localise aux extrémités proximales des centrioles et soutient la biogenèse des centrioles, leur cohésion et leur intégrité structurelle au cours du cycle cellulaire. **CEP135** intervient dans les processus de maturation du centrosome et d’organisation des microtubules, qui coordonnent l’assemblage d’un fuseau bipolaire et la ségrégation fidèle des chromosomes lors de la mitose. En influençant le nombre et l’architecture des centrosomes, **CEP135** est associé à des mécanismes qui régissent la stabilité génomique et la prolifération cellulaire. Le dérèglement des voies associées aux centrosomes impliquant **CEP135** a été étudié dans des troubles du développement ainsi que dans des contextes liés au cancer, où l’on observe une dynamique du fuseau anormale et une aneuploïdie.

CEP135 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEP135 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEP135 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEP135 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEP135, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEP135. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEP135 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEP135 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEP135 dans les cellules tumorales présentant une expression de CEP135 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.