CENP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402359

概要

CENPAは、セントロメアにおいて標準的なH3に置き換わって取り込まれるヒストンH3バリアントであるCENP-Aをコードし、セントロメアクロマチンの形成と、キネトコアのアイデンティティの規定に関与します。CENP-Aの沈着および維持は、セントロメア組み立て経路や有糸分裂細胞周期の進行と協調して制御されており、正確な染色体の整列と分配を支えます。CENP-Aの量やセントロメア局在が乱れるとキネトコア機能が不安定化し、染色体不安定性や異数性が促進されます。これは、多くのがんモデルで観察されるゲノム維持機構の異常との関連で頻繁に研究されています。

CENP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCENPA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CENPA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CENPAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CENP-Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CENP-Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CENPA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CENP-Aの機能に不可欠なCENPAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CENPAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CENP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCENP-A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CENPA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CENP-A HDRプラスミド（h）および CENP-A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCENPAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCENPA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。