Plásmido CRISPR de Activación (h) CEACAM1: sc-417666-ACT

CEACAM1 (molécula 1 de adhesión celular relacionada con el antígeno carcinoembrionario) es una glucoproteína de superficie celular humana de la superfamilia de las inmunoglobulinas que media la adhesión homofílica y heterofílica y regula la señalización a través de sus motivos ITIM citoplasmáticos. Participa en la polarización epitelial, la organización de las uniones estrechas y el control del crecimiento dependiente del contacto, además de modular la activación de células inmunitarias y las respuestas inflamatorias mediante vías dependientes de SHP. CEACAM1 se integra en programas de comunicación célula–célula que influyen en la migración, el comportamiento angiogénico y la remodelación tisular, vinculando su estado de expresión con la biología tumoral y la regulación inmunitaria. Se ha informado de una expresión desregulada de CEACAM1 en múltiples tipos de cáncer y en contextos inflamatorios, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la señalización acoplada a la adhesión y las interacciones con el microambiente.

CEACAM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CEACAM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CEACAM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CEACAM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CEACAM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CEACAM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CEACAM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CEACAM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CEACAM1 en células tumorales con expresión de CEACAM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.