Plásmido Doble Nickase (h) CDKN2C/p18 INK4c: sc-401214-NIC

CDKN2C codifica p18INK4c, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que se une a CDK4/6 para restringir la actividad quinasa dependiente de ciclina D e imponer el punto de control G1/S del ciclo celular. Al limitar la fosforilación de RB1 y los programas transcripcionales posteriores de E2F, CDKN2C contribuye al control de la proliferación, la diferenciación celular y las respuestas asociadas a la senescencia. La alteración de la función o la expresión de CDKN2C se ha vinculado con la progresión desregulada del ciclo celular observada en múltiples contextos de cáncer y neoplasias hematológicas, y con frecuencia se estudia junto con otros reguladores de la familia INK4. CDKN2C también es relevante en vías que integran la señalización mitogénica con el control de puntos de control, incluida la regulación de los ejes RB/E2F y CDK4/6.

CDKN2C/p18 INK4c El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN2C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN2C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN2C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN2C alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.