CDKN2C/p18 INK4c Double Nickaseプラスミド (h): sc-401214-NIC

CDKN2Cはp18INK4cをコードしており、p18INK4cはCDK4/6に結合してCyclin D依存性キナーゼ活性を抑制し、G1/S細胞周期チェックポイントを維持するサイクリン依存性キナーゼ阻害因子です。RB1のリン酸化およびそれに続くE2F転写プログラムを制限することで、CDKN2Cは増殖制御、細胞分化、ならびに老化関連応答に寄与します。CDKN2Cの機能や発現の変化は、複数のがん種や血液悪性腫瘍でみられる細胞周期進行の破綻と関連づけられており、他のINK4ファミリーの制御因子と併せて研究されることが多い遺伝子です。CDKN2Cはまた、RB/E2FやCDK4/6軸の制御を含む、有糸分裂促進シグナルとチェックポイント制御を統合する経路においても重要です。

CDKN2C/p18 INK4c ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN2C 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN2C内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN2Cの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN2Cが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。