Cdk6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400309-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cdk6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cdk6 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cdk6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDK6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdk6: sc-7961
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cdk6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400309-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400309-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK6 kodiert die Cyclin-abhängige Kinase 6 (Cdk6), eine Serin/Threonin-Kinase, die mit D‑Typ‑Cyclinen zusammenwirkt, um Proteine der RB-Familie zu phosphorylieren und den Übergang von der G1- in die S‑Phase zu fördern. Über die reine Zellzykluskontrolle hinaus ist Cdk6 in mitogene Signalausgänge der MAPK- sowie der PI3K/AKT‑Signalwege eingebunden und trägt zu Transkriptionsprogrammen bei, die Proliferation und Differenzierung in hämatopoetischen und anderen Zelllinien koordinieren. Eine dysregulierte CDK6‑Aktivität ist häufig mit onkogener Proliferation und veränderter Checkpoint-Kontrolle verknüpft; entsprechend wird CDK6 zusammen mit verwandten CDKs in Mechanismen der Wachstumsfaktorabhängigkeit, Seneszenz und Linienfestlegung untersucht. Als Knotenpunkt, der proliferative Signale mit der Zellzyklusmaschinerie integriert, wird CDK6 häufig in Modellen der Tumorbiologie und proliferativer Erkrankungen analysiert.
Cdk6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDK6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDK6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDK6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDK6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.