Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdk2: sc-400111-ACT

CDK2 codifica la quinasa dependiente de ciclina 2 (Cdk2), una quinasa de serina/treonina que integra señales mitogénicas con la progresión del ciclo celular. En complejo con las ciclinas E y A, Cdk2 promueve la transición G1/S y la progresión por la fase S mediante la fosforilación de sustratos implicados en el licenciamiento de la replicación del ADN, la dinámica de las horquillas de replicación y el control de puntos de control. La actividad de CDK2 se coordina con la señalización Rb–E2F, las respuestas al estrés replicativo mediadas por ATR/CHK1 y las redes de inhibidores de CDK como p21 y p27. La expresión o activación desregulada de CDK2 se estudia con frecuencia en patologías proliferativas y en contextos de inestabilidad genómica, donde un control alterado del ciclo celular afecta a la señalización oncogénica y a la tolerancia al daño del ADN.

Cdk2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdk2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdk2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdk2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdk2 en células tumorales con expresión de CDK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.