Plásmido Doble Nickase (h) Cdc34: sc-403783-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cdc34 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cdc34 (h) y el plásmido de doble nickasa Cdc34 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDC34. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdc34 Anticuerpo (H-4): sc-28381
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cdc34 | sc-403783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Cdc34 | sc-403783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El CDC34 humano codifica Cdc34, una enzima E2 conjugadora de ubiquitina que se asocia con ligasas E3 del tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box) para ensamblar cadenas de poliubiquitina enlazadas por K48 y promover la degradación proteasomal de reguladores clave del ciclo celular y de la replicación del ADN. Al controlar la ubiquitinación de sustratos como los inhibidores de CDK y los factores de licenciamiento de la replicación, Cdc34 ayuda a coordinar la progresión G1/S, la señalización de puntos de control y la estabilidad del genoma. La actividad o expresión desregulada de CDC34 se ha vinculado con alteraciones de la proteostasis y programas de proliferación aberrantes observados en múltiples contextos relevantes para el cáncer, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar dependencias de la vía de la ubiquitina. CDC34 también se utiliza para investigar la circuitería de las ligasas cullin-RING, la dinámica de la señalización por ubiquitina y las respuestas adaptativas al estrés proteotóxico o replicativo.
Cdc34 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDC34 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDC34. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDC34. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDC34 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.