Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdc20: sc-400583-ACT

El CDC20 humano codifica Cdc20, un coactivador esencial del complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C) que controla la transición de metafase a anafase al promover la degradación mediada por ubiquitina de reguladores mitóticos clave, incluidos la securina y la ciclina B. Cdc20 integra la señalización del punto de control del ensamblaje del huso mediante interacciones con MAD2, BUBR1 y BUB3 para garantizar una segregación cromosómica precisa y mantener la estabilidad genómica. La expresión desregulada de CDC20 o la evasión del punto de control puede contribuir a la inestabilidad cromosómica y a una proliferación aberrante, lo que lo convierte en un nodo frecuentemente estudiado en las vías de control del ciclo celular y de fidelidad mitótica. Los estudios centrados en CDC20 se utilizan ampliamente para investigar la dinámica del APC/C, la proteostasis durante la mitosis y los mecanismos que vinculan los errores mitóticos con fenotipos de inestabilidad genómica.

Cdc20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDC20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdc20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDC20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDC20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdc20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDC20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdc20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdc20 en células tumorales con expresión de CDC20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.