CD8-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419577

概要

Cd8b1 は CD8-βをコードしており、CD8-βはI型膜貫通型糖タンパク質としてCD8-αと対になり、細胞傷害性Tリンパ球および一部の樹状細胞においてCD8共受容体を形成します。MHCクラスIに結合し、SrcファミリーキナーゼであるLCKをリクルートすることで、CD8-βはT細胞受容体（TCR）シグナルの強度調節、免疫シナプス形成、ならびに活性化・増殖・エフェクター分化を制御する下流のリン酸化カスケードに寄与します。CD8-βの発現は胸腺での選択や末梢CD8+ T細胞の維持にも影響し、抗原特異的免疫と免疫寛容に関与します。CD8共受容体機能の変化は免疫調節異常と関連し、CD8+ T細胞応答が疾患表現型を規定する感染、炎症、腫瘍免疫のモデルにおいて重要です。

CD8-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd8b1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd8b1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd8b1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD8-βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD8-βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd8b1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD8-βの機能に不可欠なCd8b1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd8b1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD8-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD8-β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd8b1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD8-β HDRプラスミド（m）および CD8-β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd8b1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd8b1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。