CD8-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400372

Visão geral

CD8A codifica o CD8-α, uma glicoproteína transmembranar do tipo I que forma homodímeros CD8αα ou heterodímeros CD8αβ em células T e em um subconjunto de células NK, atuando como co-receptor no reconhecimento de antígenos restrito ao MHC de classe I. Ao se ligar ao MHC I e se associar à LCK, o CD8-α promove a sinalização do TCR, a formação da sinapse imunológica e vias a jusante que controlam a diferenciação de efetores citotóxicos e a produção de citocinas. A expressão de CD8A é amplamente usada para definir estados de linfócitos citotóxicos e para dissecar programas de especificação de linhagem, ativação e exaustão. A desregulação da sinalização dependente de CD8-α e dos fenótipos de células T CD8+ é relevante em contextos de pesquisa sobre microambientes imunes tumorais, infecção viral crônica, autoimunidade e imunodeficiências.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD8-α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CD8A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CD8A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CD8A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD8-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CD8A para a investigação da sinalização de CD8-α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CD8A críticos para a função CD8-α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CD8A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CD8-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CD8-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CD8A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CD8-α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CD8-α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CD8A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CD8A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.