Plásmido Doble Nickase (h) CD74: sc-400279-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD74 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD74 (h) y el plásmido de doble nickasa CD74 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD74. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD74 Anticuerpo (LN-2): sc-6262
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD74 | sc-400279-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD74 | sc-400279-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD74 codifica la cadena invariante (Ii), una proteína transmembrana de tipo II que actúa como chaperona esencial de las moléculas del MHC de clase II en las células presentadoras de antígeno. Al ocupar la hendidura de unión al péptido en el retículo endoplásmico y dirigir el tráfico del MHC II a través de compartimentos endosómicos, CD74 favorece la carga de péptidos y su presentación a las células T CD4+ como parte de la señalización inmunitaria adaptativa. CD74 también funciona como componente receptor en la superficie celular para el factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF), vinculándolo a vías posteriores como NF-κB y MAPK que regulan la inflamación, la supervivencia celular y la activación de células inmunitarias. La expresión y la señalización desreguladas de CD74 se han asociado con patología mediada por el sistema inmunitario y se estudian con frecuencia en el contexto de neoplasias hematológicas y microambientes inflamatorios.
CD74 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD74 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD74. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD74. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD74 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.