Plásmido Doble Nickase (m) CD73: sc-423919-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)CD73 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD73 (m) y el plásmido de doble nickasa CD73 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nt5e. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) CD73 | sc-423919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) CD73 | sc-423919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Nt5e del ratón codifica CD73 (ecto-5′-nucleotidasa), una ectoenzima anclada a GPI que cataliza la desfosforilación del AMP extracelular a adenosina, modulando la señalización purinérgica y el metabolismo de nucleótidos en el microambiente tisular. Al controlar la disponibilidad local de adenosina, CD73 influye en la señalización vinculada a AMPc, los estados de activación de las células inmunitarias, la biología de la barrera endotelial y las respuestas asociadas a la hipoxia. La actividad de CD73 se integra en el eje ATP–adenosina junto con CD39 y los receptores de adenosina para regular la inflamación, la remodelación vascular y la adaptación metabólica. La expresión o actividad desregulada de CD73 se ha implicado en modelos de inflamación crónica, lesión isquémica, fibrosis y supresión inmunitaria asociada a tumores, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos.
CD73 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nt5e en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nt5e. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nt5e. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nt5e alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.