Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD5L: sc-404865-ACT

CD5L (CD5 molecule-like) est une protéine sécrétée de type récepteur scavenger riche en cystéines, produite principalement par les macrophages, qui module l’homéostasie de l’immunité innée et l’inflammation. Elle se lie à divers ligands lipidiques et microbiens et influence des processus tels que la polarisation des macrophages, la prise en charge des cellules apoptotiques et le métabolisme lipidique, en s’intégrant à des voies liées à la signalisation des cytokines et au remodelage tissulaire. CD5L a été associée à des pathologies à médiation immunitaire et à l’inflammation métabolique, et des altérations de son expression ont été rapportées dans des contextes tels que les lésions athéroscléreuses, les états inflammatoires chroniques et la biologie des macrophages associés aux tumeurs. Ces caractéristiques font de CD5L une cible utile pour disséquer, dans des modèles cellulaires humains, les signaux microenvironnementaux pilotés par les macrophages ainsi que les interactions croisées entre lipides et immunité.

CD5L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD5L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD5L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD5L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD5L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD5L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD5L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD5L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD5L dans les cellules tumorales présentant une expression de CD5L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.