Plásmido Doble Nickase (h) CD59: sc-417670-NIC

CD59 (protectina) es un regulador de membrana del complemento anclado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que inhibe el ensamblaje del complejo terminal de ataque a la membrana (C5b-9) en células del hospedador. Al restringir la citólisis mediada por el complemento y limitar el daño colateral, CD59 ayuda a mantener la homeostasis inmunitaria en la superficie celular y modula la señalización inflamatoria en compartimentos vasculares, hematopoyéticos y epiteliales. Las alteraciones en la expresión o la función de CD59 se asocian con una activación desregulada del complemento y contribuyen a mecanismos de enfermedad que implican hemólisis, neuroinflamación y lesión tisular en patologías impulsadas por el complemento. Como proteína de superficie ampliamente expresada, CD59 también se utiliza para estudiar la biología de los microdominios de membrana, la evasión inmunitaria y la comunicación cruzada entre la inmunidad innata y los programas de supervivencia celular.

CD59 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD59 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD59. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD59. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD59 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.