CD362/SDC2/Syndecan-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401392-ACT

SDC2 kodiert Syndecan-2 (CD362), ein transmembranöses Heparansulfat-Proteoglykan, das die perizelluläre Matrix organisiert und als Korezeptor für Wachstumsfaktoren, Chemokine und Liganden der extrazellulären Matrix fungiert. Durch die Koordination von Interaktionen mit Integrinen, Kinasen der Src-Familie und der Rho-GTPase-Signalgebung moduliert Syndecan-2 die Dynamik fokaler Adhäsionen, den Umbau des Zytoskeletts und die Zellmigration, mit nachgeschalteten Effekten auf Signalwege wie FAK/ERK und Wnt/β-Catenin. SDC2 trägt außerdem über Ektodomänen-Shedding zur Zell-Zell-Kommunikation und zur Proteaseaktivität bei und beeinflusst dadurch angiogene und entzündliche Mikroumgebungen. Eine dysregulierte SDC2-Expression wurde mit Tumorzellinvasion, fibrosebedingtem Remodeling und veränderter Stromasignalgebung in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Signalstudien unterstützt.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SDC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD362/SDC2/Syndecan-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SDC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SDC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD362/SDC2/Syndecan-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SDC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD362/SDC2/Syndecan-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD362/SDC2/Syndecan-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SDC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.