CD300E CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415572-ACT

CD300E kodiert einen Immunrezeptor der CD300-Familie, der überwiegend auf Zellen der myeloischen Linie exprimiert wird und an der Regulation der angeborenen Immunaktivierung beteiligt ist. Die Aktivierung von CD300E beeinflusst Signalnetzwerke, die die Produktion entzündlicher Zytokine, die Aktivierung von Phagozyten und die Funktion antigenpräsentierender Zellen koordinieren; dabei greift sie in ITAM-assoziierte Signalwege und nachgeschaltete Kinasekaskaden ein, die zelluläre Antworten auf Pathogene und Gewebeschädigung prägen. Durch die Modulation myeloischer Aktivierungszustände ist CD300E für Studien zur Immunfehlregulation bei chronischer Entzündung, Autoimmunität und tumorassoziiertem myeloischem Remodeling relevant. Seine Expressionsdynamik und sein Signalausstoß machen es zu einem nützlichen molekularen Ansatzpunkt, um die rezeptorvermittelte Kontrolle von Monozyten, Makrophagen und dendritischen Zellen zu untersuchen.

CD300E Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD300E-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD300E Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD300E-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD300E-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD300E-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD300E-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD300E-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD300E-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD300E-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.