CD2AP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419542

概要

Cd2apは、CD2関連タンパク質（CD2-associated protein：CD2AP）をコードしており、CD2APはアダプター／スキャフォールドとして、特化した細胞接着部位において膜輸送と協調しながらアクチン細胞骨格の再構築を制御します。マウス細胞では、CD2APはスリット膜やエンドサイトーシス機構との相互作用を介してエンドサイトーシスおよび小胞輸送の選別に関与し、細胞極性やバリア機能を支えます。CD2APに連なるネットワークは、接着のダイナミクスや細胞骨格の構築を司るシグナル伝達経路と交差しており、接着部位の安定性や受容体ターンオーバーを研究するうえで有用な結節点となります。Cd2apの遺伝学的撹乱は、糸球体濾過バリアの障害や蛋白尿を伴う腎表現型と関連づけられており、また、疾患関連モデルにおける免疫シナプスの構築や上皮の完全性を検証する目的でも利用されています。

CD2AP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd2ap遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd2ap内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd2apのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD2APタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD2APシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd2ap欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD2APの機能に不可欠なCd2apエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd2apゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD2AP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD2AP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd2ap遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD2AP HDRプラスミド（m）および CD2AP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd2apホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd2ap標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。