CD27L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423453

概要

Cd70は、TNFスーパーファミリーに属するII型膜貫通型リガンドであるCD27L（CD70）をコードし、T細胞・B細胞・NK細胞上のCD27に結合して共刺激シグナルを調節します。CD27–CD70相互作用は適応免疫の活性化の様式を規定し、下流のNF-κBおよびMAPKに連動した転写プログラムを介して、リンパ球の増殖・生存・分化を支持します。抗原提示細胞が活性化した際のCD70発現が厳密に制御されることで、免疫プライミングと免疫恒常性のバランスが保たれます。CD70シグナルの破綻は、異常な炎症応答、胚中心反応のダイナミクスの変化、自己免疫やがん免疫生物学の研究に関連する免疫調節異常に関与することが示唆されています。

CD27L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCd70遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cd70内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cd70のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD27Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD27Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cd70欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD27Lの機能に不可欠なCd70エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cd70ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD27L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD27L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cd70遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD27L HDRプラスミド（m）および CD27L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCd70ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCd70標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。