CD21 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401352-ACT

CR2 kodiert CD21, einen Komplementrezeptor, der vor allem auf B‑Zellen und follikulären dendritischen Zellen exprimiert wird, C3d‑opsonisierte Antigene bindet und zusammen mit CD19 und CD81 die Schwelle für die Signalübertragung des B‑Zell‑Rezeptors senkt. Über diese Ko‑Rezeptorfunktion verknüpft CD21 die Komplementmarkierung mit der adaptiven Immunität und beeinflusst dadurch Antigenaufnahme, Keimzentrumsreaktionen und Antikörperantworten. CD21 dient zudem als zellulärer Anheftungsfaktor für das Epstein‑Barr‑Virus und verbindet damit die CR2‑Biologie mit Signalwegen, die am viralen Eintritt und an der nachgeschalteten Immunaktivierung beteiligt sind. Eine dysregulierte CR2/CD21‑Aktivität wurde mit veränderter humoraler Immunität und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Autoimmunität und B‑zellgetriebene Krankheitsmechanismen relevant sind.

CD21 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CR2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD21 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CR2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CR2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD21-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CR2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD21-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD21-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CR2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.