CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404517

概要

ENPP3は、細胞外のヌクレオチド基質を加水分解してプリン作動性シグナル伝達および局所のリン酸／ピロリン酸バランスを調節する、II型膜貫通性の外部酵素であるエクトヌクレオチド・ピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼ3（CD203c）をコードします。CD203cは好塩基球および肥満細胞で高発現しており、FcεRIを介した活性化に伴って迅速に発現が上昇することから、ヌクレオチド代謝と脱顆粒や炎症性シグナル伝達プログラムを結び付ける分子として位置付けられます。ENPP3は細胞外ヌクレオチドの制御を通じて、細胞表面でのシグナル伝達ダイナミクス、サイトカイン放出、ならびに組織微小環境における免疫細胞間コミュニケーションに影響を与えます。ENPP3/CD203cの発現変化は免疫調節異常と関連付けられており、アレルギー性炎症や関連する免疫細胞活性化状態の研究において機能マーカーとして広く利用されています。

CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるENPP3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ENPP3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ENPP3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD203cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD203cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ENPP3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD203cの機能に不可欠なENPP3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ENPP3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCD203c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ENPP3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD203c HDRプラスミド（h）および CD203c HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはENPP3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のENPP3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。