CD203c Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404517

Panoramica

ENPP3 codifica per l’ectonucleotide pirofosfatasi/fosfodiesterasi 3 (CD203c), un ectoenzima transmembrana di tipo II che idrolizza substrati nucleotidici extracellulari per modulare la segnalazione purinergica e l’equilibrio locale tra fosfato e pirofosfato. CD203c è fortemente espresso su basofili e mastociti ed è rapidamente sovraregolato in seguito all’attivazione mediata da FcεRI, collegando il metabolismo dei nucleotidi ai programmi di degranulazione e di segnalazione infiammatoria. Attraverso la regolazione dei nucleotidi extracellulari, ENPP3 influenza la dinamica della segnalazione di superficie, il rilascio di citochine e la comunicazione tra cellule immunitarie nei microambienti tissutali. Alterazioni dell’espressione di ENPP3/CD203c sono state associate a disregolazione immunitaria e il gene è ampiamente utilizzato come marcatore funzionale negli studi sull’infiammazione allergica e su stati di attivazione correlati delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD203c (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ENPP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ENPP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ENPP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD203c.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ENPP3 per lo studio della segnalazione di CD203c, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ENPP3 critici per la funzione di CD203c
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ENPP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD203c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD203c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ENPP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD203c Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD203c (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ENPP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ENPP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.