CD16-B Double Nickase Plasmid (h): sc-417469-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD16-B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD16-B Double-Nickase-Plasmid (h) und CD16-B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FCGR3B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD16-B: sc-73799
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD16-B Double Nickase Plasmid (h) | sc-417469-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD16-B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417469-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCGR3B kodiert CD16-B, einen über einen Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-Anker membranständigen Fc-Gamma-Rezeptor, der überwiegend auf Neutrophilen exprimiert wird, IgG-haltige Immunkomplexe bindet und zu Fc-vermittelten Effektorantworten beiträgt. CD16-B ist an der Elimination von Immunkomplexen beteiligt und moduliert über Crosstalk mit Integrinen und nachgeschalteten Kinasen die Adhäsion von Neutrophilen, die Degranulation sowie inflammatorische Signalwege und prägt damit die Aktivierung der angeborenen Immunantwort. Kopienzahlvariationen und allelische Polymorphismen in FCGR3B wurden mit veränderter Rezeptorexpression und einer erhöhten Anfälligkeit für immunkomplexgetriebene Entzündungen in Verbindung gebracht, darunter systemischer Lupus erythematodes und andere Autoimmunphänotypen. Als Immunrezeptor der Zelloberfläche wird CD16-B häufig im Kontext der Neutrophilenbiologie, antikörperabhängiger Antworten und der Regulation inflammatorischer Signalwege untersucht.
CD16-B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FCGR3B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FCGR3B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FCGR3B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FCGR3B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.