CD14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400344

概要

CD14は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型のパターン認識共受容体であり、LBPと協調して細菌性リポ多糖（LPS）に結合し、そのリガンドをTLR4–MD-2複合体へ受け渡すことで自然免疫シグナル伝達を開始します。単球、マクロファージ、樹状細胞で機能し、MyD88依存性およびTRIF依存性経路を増幅してNF-κBやIRFの活性化、サイトカイン産生、炎症関連遺伝子の発現を促進します。エンドトキシン認識にとどまらず、CD14は多様な病原体関連分子パターン（PAMP）や損傷関連分子パターン（DAMP）の認識にも関与し、貪食および抗原提示の調節にも寄与します。CD14シグナルの制御破綻は、敗血症の病態、慢性炎症性疾患、ならびに免疫制御に関連する腫瘍随伴性骨髄系細胞の表現型など、異常な炎症応答と結び付けられています。

CD14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCD14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CD14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CD14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CD14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD14の機能に不可欠なCD14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CD14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCD14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CD14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD14 HDRプラスミド（h）および CD14 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCD14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCD14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。