Plasmide Double Nickase (h) CD137L: sc-404974-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD137L correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD137L Double Nickase (h) et le plasmide CD137L Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TNFSF9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD137L Antibody (G-10): sc-398933
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD137L | sc-404974-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD137L | sc-404974-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFSF9 code pour CD137L (ligand 4-1BB), un membre de la superfamille du TNF exprimé par les cellules présentatrices d’antigène, qui se lie à CD137 (TNFRSF9) sur les lymphocytes T et les cellules NK activés afin de façonner la signalisation co‑stimulatrice. Les interactions CD137L–CD137 favorisent la formation de la synapse immunologique et régulent la production de cytokines, la prolifération et la survie via des programmes de signalisation liés à NF‑κB et aux MAPK. Au-delà de la signalisation « forward » vers les lymphocytes CD137+, CD137L peut aussi transmettre des signaux « reverse » dans les cellules myéloïdes, influençant leur état d’activation, leur différenciation et leur production de médiateurs inflammatoires. Une activité dérégulée de TNFSF9/CD137L a été impliquée dans l’inflammation chronique et l’auto-immunité, et est fréquemment étudiée en immunologie des tumeurs, où le contexte immunitaire et les voies de checkpoint modulent les réponses dépendantes de CD137L.
CD137L Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFSF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFSF9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFSF9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFSF9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.