CD137L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423455

概要

Tnfsf9 は CD137L（4-1BBL）をコードしており、主として抗原提示細胞に発現する TNF スーパーファミリーのリガンドである。CD137（TNFRSF9）と結合することで、T 細胞やその他の免疫エフェクターに強力な共刺激シグナルを与える。CD137L–CD137 シグナル伝達は NF-κB および MAPK 経路の活性化を促進し、T 細胞の増殖・生存・サイトカイン産生、ならびに記憶応答の形成を支持する。さらに、樹状細胞の成熟や骨髄系細胞機能にも影響を及ぼす。マウスモデルでは、Tnfsf9 の活性が炎症回路と免疫恒常性の調節に関与し、自己免疫、慢性炎症、腫瘍免疫監視といった状況に影響を与えることが示唆されている。これらの役割により、CD137L は共刺激依存的な免疫表現型や抗原駆動性応答を解析するうえで有用な結節点となる。

CD137L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnfsf9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnfsf9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnfsf9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CD137Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CD137Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnfsf9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CD137Lの機能に不可欠なTnfsf9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnfsf9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CD137L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCD137L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnfsf9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CD137L HDRプラスミド（m）および CD137L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnfsf9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnfsf9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。