CCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402130

概要

CCS（copper chaperone for superoxide dismutase）は細胞質に存在するメタロシャペロンで、SOD1に銅を供給し、直接的な相互作用とジスルフィド結合の形成を介してその成熟を促進します。CCSはSOD1が適切に機能することを可能にすることで、細胞の抗酸化防御を支え、ミトコンドリア呼吸やその他の酸化還元活性プロセスに由来する酸化損傷を抑制します。CCSの機能は銅恒常性およびレドックスシグナル伝達と関連しており、その下流ではタンパク質の安定性や細胞の生存に影響を与えるストレス応答性経路に作用します。CCS–SOD1軸の制御破綻は、金属の取り扱い異常や活性酸素種が疾患関連の表現型に寄与する酸化ストレス生物学や神経変性の文脈で研究されています。

CCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCCS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CCS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CCSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CCSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CCSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CCS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CCSの機能に不可欠なCCSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CCSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCCS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CCS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CCS HDRプラスミド（h）および CCS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCCSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCCS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。