Plasmide Double Nickase (h) CCNB1/cyclin B1: sc-400114-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CCNB1/cyclin B1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CCNB1/cyclin B1 Double Nickase (h) et le plasmide CCNB1/cyclin B1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCNB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CCNB1/cyclin B1 Antibody (GNS1): sc-245
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CCNB1/cyclin B1 | sc-400114-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CCNB1/cyclin B1 | sc-400114-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNB1 code la cycline B1, une sous-unité régulatrice essentielle du complexe kinase CDK1, qui pilote la transition G2/M et coordonne l’entrée en mitose. L’accumulation de la cycline B1 et sa translocation dans le noyau favorisent des processus tels que la condensation des chromosomes, la rupture de l’enveloppe nucléaire et l’assemblage du fuseau, via des cascades de phosphorylation finement orchestrées dans le temps. L’activité de CCNB1 est intégrée aux voies de signalisation des points de contrôle, notamment ATR/CHK1 et le point de contrôle d’assemblage du fuseau, afin de garantir la stabilité génomique. Une expression ou un renouvellement (turnover) dérégulé de CCNB1 est fréquemment associé à des états prolifératifs et à une instabilité chromosomique, ce qui en fait un marqueur largement utilisé ainsi qu’un nœud mécanistique central dans la recherche sur le cycle cellulaire et la biologie du cancer.
CCNB1/cyclin B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.