Plasmide Double Nickase (h) CCK-AR: sc-402419-NIC

CCKAR code le récepteur A de la cholécystokinine (CCK-AR), un RCPG de classe A qui se lie aux peptides de cholécystokinine afin de réguler la physiologie digestive et neuroendocrinienne. Après liaison du ligand, CCK-AR se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase Cβ, la mobilisation du Ca²⁺ médiée par l’inositol trisphosphate, la signalisation via la protéine kinase C, ainsi que des réponses MAPK/ERK en aval qui modulent la sécrétion, la motilité et l’excitabilité cellulaire. Dans les tissus humains, la signalisation de CCKAR contribue à la coordination de la contraction de la vésicule biliaire, de la libération d’enzymes pancréatiques et des circuits liés à la satiété, en intégrant la détection des nutriments avec des signaux hormonaux et neuronaux. Une signalisation RCPG dérégulée et des modifications de l’expression de CCKAR ont été étudiées dans des contextes incluant des phénotypes métaboliques et des altérations fonctionnelles gastro-intestinales, ce qui étaye sa pertinence pour des études de biologie des maladies centrées sur des voies de signalisation.

CCK-AR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCKAR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCKAR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCKAR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCKAR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.