CCDC111 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404310

概要

PRIMPOL（CCDC111としても知られる）はPrimPolをコードしており、PrimPolはプライマーゼ／ポリメラーゼとして、損傷部位の下流でDNA合成を再プライミングし、さらに複製フォークの再始動を助けることでDNA損傷耐性を促進します。この働きはS期におけるゲノム安定性を支えるとともに、複製ストレス応答、複製後修復、ミトコンドリアDNAおよび核DNAの完全性維持に関与する経路と交差します。複製ストレスの制御異常や損傷乗り越えの障害は、変異の蓄積や染色体不安定性と関連するため、PRIMPOLはがんに関連するゲノム維持機構に影響するメカニズムを研究するうえで重要な標的となります。加えて、PRIMPOLの機能は、酸化損傷、UV誘導性損傷、ならびに停止したフォークの回復過程におけるポリメラーゼ切り替え事象の文脈で検討されることが多いです。

CCDC111 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRIMPOL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRIMPOL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRIMPOLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CCDC111タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CCDC111シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRIMPOL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CCDC111の機能に不可欠なPRIMPOLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRIMPOLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CCDC111 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCCDC111 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRIMPOL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CCDC111 HDRプラスミド（h）および CCDC111 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRIMPOLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRIMPOL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。