CCDC109A Lentiviral Activation Particles (h): sc-413850-LAC

MCU (CCDC109A) kodiert die porenbildende Untereinheit des mitochondrialen Calcium-Uniporters, einem zentralen Determinanten der mitochondrialen Ca²⁺-Aufnahme über die innere Membran. Durch die Kopplung zytosolischer Ca²⁺-Signale an die Ca²⁺-Spiegel in der Matrix reguliert MCU die oxidative Phosphorylierung, die Enzymaktivität des Tricarbonsäurezyklus und die Produktion reaktiver Sauerstoffspezies und prägt damit die zelluläre Bioenergetik und Stressantworten. Der MCU-abhängige Ca²⁺-Fluss beeinflusst zudem die mitochondriale Permeabilitätsübergangspore, Apoptose sowie Ca²⁺-regulierte Transkriptionsprogramme, die mit Stoffwechsel und Entzündung verknüpft sind. Eine dysregulierte MCU-Aktivität wurde mit veränderter mitochondrialer Funktion in Kontexten wie Neurodegeneration, Ischämie-Reperfusionsschädigung, Kardiomyopathie und krebsassoziiertem metabolischem Remodeling in Verbindung gebracht, weshalb MCU häufiges Ziel in Studien zur mitochondrialen Signalübertragung ist.

CCDC109A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MCU-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CCDC109A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MCU-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CCDC109A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MCU-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.