CBS Lentiviral Activation Particles (m): sc-419496-LAC

Das Mausgen *Cbs* kodiert die Cystathionin-β-Synthase (CBS), ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym, das im Transsulfurierungsweg die Kondensation von Homocystein und Serin zu Cystathionin katalysiert. Indem CBS den Homocysteinfluss in Richtung Cystein steuert, trägt es zur Regulation des Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsels, des Redoxgleichgewichts über die Glutathion-Biosynthese sowie zellulärer Antworten auf oxidativen Stress bei. CBS kann außerdem zur endogenen Bildung von Schwefelwasserstoff beitragen und verknüpft damit den Stoffwechsel schwefelhaltiger Aminosäuren mit mitochondrialer Funktion und Signalgebung. Eine dysregulierte CBS-Aktivität stört die Homocystein-Homöostase und den Schwefelstoffwechsel – Prozesse, die häufig in Modellen für kardiovaskuläre Erkrankungen, Neurobiologie und Stoffwechselkrankheiten untersucht werden.

CBS Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Cbs-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CBS Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Cbs-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CBS-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Cbs-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.