CBS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400877

概要

シスタチオニンβ合成酵素（CBS）はピリドキサールリン酸依存性酵素であり、セリンとホモシステインの縮合反応を触媒してシスタチオニンを生成し、ホモシステインをトランススルフレーション経路へと不可逆的に導きます。一炭素代謝とシステイン生合成をつなぐことで、CBSは下流のグルタチオン産生を介して細胞のレドックスバランスに影響し、含硫アミノ酸の恒常性にも寄与します。さらにCBS活性は内因性の硫化水素（H₂S）産生も支え、ミトコンドリア機能やストレス応答性シグナル伝達に影響を与えます。CBSの調節異常は高ホモシステイン血症や硫黄代謝に関わる先天代謝異常と関連しており、CBS発現の変化は、心血管系および神経発達に関わる表現型に関連する酸化ストレスや代謝リプログラミングの文脈で研究されています。

CBS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCBS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CBS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CBSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CBSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CBSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CBS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CBSの機能に不可欠なCBSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CBSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CBS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCBS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CBS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CBS HDRプラスミド（h）および CBS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCBSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCBS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。