Plásmido CRISPR de Activación (h) CBP/KAT3A/CREBBP: sc-400200-ACT

CREBBP codifica la proteína de unión a CREB (CBP/KAT3A), un coactivador transcripcional y acetiltransferasa de lisina que acetila histonas y sustratos no histónicos para modular la accesibilidad de la cromatina y la expresión génica. CBP integra señales de CREB, receptores nucleares y factores de transcripción del desarrollo, coordinando programas implicados en el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la diferenciación y la plasticidad neuronal. A través de sus funciones en la actividad de los potenciadores (enhancers) y la elongación transcripcional, CBP participa en vías como la señalización de AMPc/CREB y en una regulación epigenética más amplia de la transcripción específica de linaje. La alteración de la actividad o la dosis de CREBBP se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y se implica de forma recurrente en la desregulación transcripcional y de la cromatina asociada al cáncer.

CBP/KAT3A/CREBBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CREBBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CBP/KAT3A/CREBBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CREBBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CREBBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CBP/KAT3A/CREBBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CREBBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CBP/KAT3A/CREBBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CBP/KAT3A/CREBBP en células tumorales con expresión de CREBBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.